稳定表达PRRSV GP2蛋白的Marc-145细胞系的构建

摘要

尽管在全球范围内努力控制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的感染,但该病毒持续在全世界的养猪业中引起经济问题。本研究以PRRSV全长感染性克隆pJXwn06为模板,利用PCR方法扩增ORF2基因序列,并克隆至慢病毒载体中,获得重组质粒pLV-EF1a-EGFP-2A-GP2。通过慢病毒包装系统获得重组的慢病毒颗粒,并将其转导至Marc-145细胞,用含有嘌呤霉素的培养基进行筛选,初筛后的细胞采用有限稀释法进行克隆,最终获得细胞系,并通过PCR、Western blot试验验证了细胞系中GP2蛋白的稳定表达。本实验成功建立了稳定表达PRRSV GP2蛋白的Marc-145细胞系,为研究GP2蛋白免疫学特性和结构功能奠定了基础。