肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移

摘要

目的:研究肝细胞癌抗原587(HCA587)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达和启动子区甲基化状态,探讨HCA587对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的调节机制.方法:纳入肝细胞癌肿瘤组织114例,分为HCC组和癌旁非癌组织(NT)组.荧光定量PCR检测HCA587的mRNA表达量;免疫组织化学和免疫印迹检测HCC组和NT组组织中HCA587的蛋白表达.基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切,并结合荧光定量PCR方法分析肝细胞癌组织中HCA587基因启动子区甲基化状态.构建重组HCA587过表达质粒(pcDNA3.1-HCA587),培养人肝细胞癌细胞系BEL-7404,转染pcDNA3.1-HCA587或者使用甲基化抑制剂5-Azacytidin处理细胞.细胞分为对照组、5-Azacytidin组、pcDNA3.1-HCA587组和pcDNA3.1-HCA587空载体(EV)组.免疫沉淀法分析HCA587与TATA盒结合蛋白相关因子9(TAF9)的结合,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力.结果:与癌旁非癌组织组比,HCC组的HCA587在mRNA和蛋白水平均上调.免疫组织化学证实HCC组组织中HCA587阳性表达.HCC组中HCA587的启动子区CpG岛甲基化水平降低.体外实验结果显示,5-Azacytidin促进BEL-7404中HCA587的表达、HCA587与TAF9的结合、BEL-7404细胞的迁移和侵袭能力,但抑制HCA587甲基化水平;另外,HCA587过表达增强BEL-7404细胞的迁移和侵袭能力.结论:HCA587高表达或抑制其启动子区甲基化可以促进HCA587与TAF9的结合及导致肝细胞癌细胞的迁移和侵袭.