嗜酸性粒细胞通过调节巨噬细胞极化减轻脂多糖诱导的急性肺损伤

摘要

目的:观察体外嗜酸性粒细胞(Eos)对巨噬细胞极化的影响,以及体内注射嗜酸性粒细胞对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的作用及其相关机制.方法:原代培养小鼠巨噬细胞,在嗜酸性粒细胞存在或不存在的情况下,将细胞暴露于脂多糖和干扰素-γ(IFN-γ)以模拟ALI,采用荧光定量PCR检测各组巨噬细胞中促炎及抗炎因子的表达,采用免疫印迹法检测巨噬细胞过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白的表达;将PPARγsiRNA(si-PPARγ)转染小鼠巨噬细胞,采用免疫印迹法检测巨噬细胞的极化情况;Balb/c小鼠随机分为对照组、ALI组和ALI+Eos组,ALI组为通过气管内注射LPS诱导ALI,ALI+Eos组给予尾静脉注射嗜酸性粒细胞,对照组尾静脉注射生理盐水.监测动物7 d的存活情况.在LPS注射后3 h和24 h处死动物,通过组织学评估左肺损伤程度,荧光定量PCR检测右肺促炎和抗炎细胞因子mRNA水平,采用免疫印迹法检测右肺组织PPARγ蛋白的表达,流式细胞术检测肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD206的百分比.结果:与嗜酸性粒细胞共培养后,用LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞,其肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6 mRNA水平呈剂量依赖性下降;而IL-10 mRNA水平和PPARγ活性呈剂量依赖性增加.巨噬细胞与嗜酸性粒细胞共培养后,其iNOS表达增加和重组人精氨酸酶1(Arg1)表达减少,呈剂量依赖性逆转.转染si-PPARγ抑制了嗜酸性粒细胞促进巨噬细胞向M2表型分化的作用.静脉注射嗜酸性粒细胞显著提高了ALI小鼠的存活率,且显著改善小鼠的肺组织损伤,降低肺组织IL-6和TNF-αmRNA水平,增加IL-10 mRNA水平和PPARγ活性.此外,嗜酸性粒细胞干预增加了肺泡巨噬细胞CD206的百分比,而iNOS的百分比明显降低.结论:嗜酸性粒细胞通过促进巨噬细胞M2型极化改善LPS诱导的ALI.