微板式化学发光酶免疫分析法临床测定人血清中孕酮

摘要

将抗兔IgG(即二抗)物理吸附于聚苯乙烯微孔板上作为通用固相,通过免疫反应制备固相抗体.采用辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系,建立了一种高通量、简便、快速的化学发光酶免疫分析方法用于临床测定人血清中的孕酮.对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、发光底物选择、发光反应时间及温育条件等进行了考察和优化,最终选定的实验条件:孕酮抗体和HRP标记物的最佳稀释度分别为1:10C1000和1:15000;选用Ⅱ号发光底物,发光反应10 min后测定;37℃水浴条件下温育1 h.对建立的方法进行了评价.该方法的灵敏度为0.08μg/L;批内和批间相对标准偏差均在15%之内;低、中、高3个不同浓度值样品的平均回收率分别为101%、101%和94.4%(在87.8%～108%之间).使用本方法和经典的放射免疫法同时对36份人血清样品进行测定,结果显示,本方法与放射免疫分析方法相关性良好,其相关系数为0.9502.