利用分子信标、单链核酸(ssDNA)及核酸染料SYBR Green Ⅰ,通过同步荧光分析法,建立了一种高灵敏、高选择性土壤汞(Hg2+)的定量检测方法.在该体系中,分子信标的荧光基团设计为荧光胺(FAM),分子信标的环设计为与ssDNA互补,但有4个T碱基错配的序列.在Hg2+存在时,分子信标的环与ssDNA通过“T-Hg2+-T”特异性结合形成双链DNA,分子信标的茎被打开,荧光基团与猝灭基团分开,荧光恢复;同时,核酸染料SYBR Green Ⅰ与双链DNA作用,SYBR Green Ⅰ的荧光信号显著增强.SYBR Green Ⅰ与FAM的最大激发波长与最大发射波长都很接近,通过同步荧光分析法检测时,两种荧光染料的荧光峰重叠,荧光信号增强,可实现Hg2+的高灵敏检测.体系的最优检测条件为:缓冲溶液的pH=8.0,孵育温度为50℃,孵育4 min,缓冲溶液中NaCl的浓度为30 mmol/L,SYBR Green Ⅰ工作液的体积为100 μL.在优化条件下,Hg2+浓度在5×10-10～4.0×104 mol/L时,SYBR Green Ⅰ及FAM总的荧光强度(△I,为体系在存在和不存在Hg2+时的荧光强度之差)与Hg2+浓度(C)间有良好的线性关系,其拟合的回归方程为△I=1.3949C+ 19.3596(R2=0.9976),方法检出限(3σ)为3×10-10 mol/L.本方法操作简单、快速、选择性好、灵敏度高、重复性好.
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