皱纹盘鲍肝和肾cDNA文库的构建及免疫相关基因的初步分析

摘要

用鳗弧菌(Vibrio anguillarum)人工感染皱纹盘鲍(Haliotis discus Hannai),取等量肝和肾组织混匀,Unizol提取总RNA.用Oligotex mRNA Kits分离mRNA和带有Oligo dT(18)的引物合成双链cDNA,将双链cDNA与PBluescript Ⅱ SK(+)载体连接后电转化E.coli DH10B,得到cDNA文库.经测定库容为5.24×105cfu/mL,插入片段大小为0.8～2.5kb,构建的文库质量较高.对文库进行测序和生物信息学初步处理,得到了高质量的EST(expressed sequence tags)1282条.用BlastX和BlastN进行序列同源性对比,发现有393个(45%)基因聚类在蛋白质和核酸水平上找到了同源序列.对具有同源序列的基因进行了分析,发现了31种与免疫相关的基因,如防御素、凝集素、基质金属蛋白酶、铁蛋白和热激蛋白等.这些基因均已在Genbank中注册.