维生素D受体对LPS诱导的大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6炎症模型的保护机制

摘要

目的探讨维生素D受体对LPS诱导的大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6炎症模型的保护机制。方法将体外培养IEC-6的细胞分为空白对照组(常规培养细胞);LPS组;1nM-1,25(OH)2D3+LPS组;10nM-1,25(OH)2D3+LPS组;100nM-1,25(OH)2D3+LPS组;200nM-1,25(OH)2D3+LPS组;500nM-1,25(OH)2D3+LPS组(分别加入1、10、100、200、500nM1,25(OH)2D3和10μg/mLLPS)。用MTT法检测细胞的生长情况;实时荧光定量PCR法检测VDR、TLR4、NF-κB、MyD88基因表达情况;Westernblot法检测Claudin-1、Occludin蛋白表达情况;ELISA法检测细胞上清中炎症因子IFN-γ、IL-6表达情况。结果在IEC-6细胞中,用总浓度为10μg/mL的LPS处理24h后,LPS组细胞存活率显著下降(P<0.05),用不同浓度1,25(OH)2D3处理后的IEC-6细胞存活率随着浓度的增加而增加。与空白对照组相比,LPS组细胞上清中炎症因子的含量有所增加,而根据预处理1,25(OH)2D3浓度的不同,其余各组炎症因子均有不同程度下降。用1,25(OH)2D3预处理后,随着VDRmRNA表达增高(P<0.05),TLR4、NF-κB、MyD88mRNA表达逐渐降低。与空白对照组相比,LPS破坏了紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1,而用1,25(OH)2D3预处理后,紧密连接蛋白Occludin和Claudin-1得到保护。结论维生素D受体通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻LPS诱导的IEC-6细胞炎症模型的炎症反应。