联合注射自身胰岛细胞瘤相关抗原2基因疫苗预防NOD小鼠自身免疫性糖尿病

摘要

目的探讨自身抗原基因疫苗胰岛素瘤相关蛋白-2（pIA-2）以及分子免疫佐剂白细胞介素4/单核细胞趋化因子-1（pIL-4/MCP-1）对糖尿病前期NOD小鼠发生自身免疫性糖尿病的预防作用。方法利用分子克隆技术构建pIA-2自身抗原基因疫苗,将4～5周龄NOD小鼠分为pIA-2治疗组（n=5）、pIL-4/MCP-1治疗组（n=5）、联合治疗组（n=5）及对照组（n=5）,分别注射pIA-2、pIL-4/MCP-1、pIA-2联合pIL-4/MCP-1、增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）,免疫结束后观察24周,比较各组糖尿病发病情况和胰岛炎的程度,并用RT-PCR方法和免疫组化法检测质粒在注射部位和胰岛的表达。两样本间均数的比较用t检验,率的比较用x~2检验进行统计。结果单用pIA2或pIL-4/MCP-1治疗的NOD小鼠发病与对照组相比无显著改善;联合应用该两种质粒的NOD小鼠在观察期内未发病。RT-PCR检测结果显示免疫结束后2周,注射部位肌细胞中均有胰岛细胞瘤相关抗原2（IA-2）及白细胞介素-4（IL-4）表达。免疫组化法发现,免疫结束后2周,pIA-2注射组小鼠胰岛的IA-2表达量增加;IL-4在胰岛上可见少量表达。免疫结束后观察24周,检测各组的胰岛炎发生率,对照组、pIA2组、pIL-4/MCP-1组、pIA2+pIL-4/MCP-1组中无胰岛炎的发生率分别为4.2%（1/24）、5%（1/20）、0（0.0）、62.5%（15/24）,外周性胰岛炎发生率分别为12.5%（3/24）、10%（2/20）、5%（1/20）、29%（7/24）,中心性胰岛炎发生率（＜50%、＞50%）分别为[50%（12/24）,33.3%（8/24）]、[40%（8/20）,45%（9/20）]、[45%（9/20）,50%（10/20）]、[4.2%（1/24）,4.2%（1/24）]。和对照组相比,联合治疗组中不发生胰岛炎的比率显著升高（x~2=18.38,P＜0.01）,发生中心性胰岛炎的比率显著降低（x~2=11.68,P＜0.001）,其余各组和对照组相比胰岛炎的发生比率无显著差异。以免疫组化法检测NOD小鼠胰岛内IA-2、IL-4的表达,显示免疫注射组IA-2、IL-4表达较对照组增强。结论联合应用pIA-2及pIL-4/MCP-1基因疫苗提前免疫胰岛炎前期的NOD小鼠可抑制和延缓糖尿病的发生。