致敏性CD4+T细胞来源的外泌体介导心肌梗死后心肌重构的机制研究

摘要

目的研究致敏性CD4+ T细胞在心肌梗死（心梗）后心肌重构中的作用。方法①体外实验:提取原代小鼠脾脏CD4+ T细胞, 用CD3/CD28抗体处理48 h后, 超高速离心并提取细胞上清液中的外泌体。将致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体与心肌成纤维细胞共同孵育48 h, 利用细胞增殖及细胞毒性检测实验（CCK-8）、Transwell实验及免疫荧光实验检测致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体对心肌成纤维细胞增殖、迁移及分化的影响。②体内实验:利用随机数字表法将40只雄性C57小鼠分成对照组（Ctrl组）、假手术组（Sham组）、心梗组（MI组）、外泌体处理组（MI+Exo组）, 每组10只。采用结扎冠状动脉左前降支复制小鼠心梗模型。MI+Exo组于制模后尾静注射外泌体40 μg/d。术后4周, 用心脏超声、定量聚合酶链反应（qPCR）评估致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体对小鼠心功能状态及心脏纤维化程度的影响。结果①体外实验:致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体可以显著增加心肌成纤维细胞增殖、迁移及分化能力〔细胞增殖（A值）:0.31±0.01比0.21±0.01, 迁移能力（个/MP）:79.20±3.34比48.80±2.13, 分化能力（α-平滑肌肌动蛋白, α-SMA;荧光强度）:1.56±0.03比1.00±0.02, 均P＆0.05〕。②体内实验:致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体可加速心梗后心功能的恶化, 表现为:与MI组比较, MI+Exo组左室射血分数（LVEF）及短轴收缩率（FS）显著下降〔LVEF:0.185±0.008比0.257±0.022, FS:（9.72±1.72）%比（14.08±1.08）%, 均P＆0.05〕, 左室舒张期末内径（LVEDD）及左室收缩期末内径（LVESD）显著增加〔LVEDD（mm）:5.43±0.29比4.62±0.35, LVESD（mm）:4.94±0.12比3.69±0.29, 均P＆0.05〕。另外, qPCR结果显示, 致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体具有促进心梗后心肌纤维化的发生, 表现为:MI+Exo组α-SMA、胶原（Col1a1、Col3a1）的mRNA表达显著高于MI组〔α-SMA（2-ΔΔCT）:4.72±0.89比3.58±0.78, Col1a1（2-ΔΔCT）:6.59±0.56比4.23±0.42, Col3a1（2-ΔΔCT）:13.40±1.03比4.96±0.36, 均P＆0.05〕。结论致敏性CD4+ T细胞来源的外泌体具有显著加速心梗后心肌病理性重构的作用。