miR-552靶向调控Wnt抑制因子-1促进MG-63骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的实验研究

摘要

目的 探讨miR-552对Wnt抑制因子-1(WIF1)的靶向调控作用以及对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移活性的影响.方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG-63和人成骨细胞hFOB1.19,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-552的表达水平.分别采用miR-552 inhibitor和shWIF1转染MG-63细胞,实验分为空白对照组、anti-阴性对照(anti-NC)组、anti-552组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1 vector共转染阴性对照(anti-552-NC)组、miR-552 inhibitor+pcDNA3.1-shWIF1(共转染)组.采用MTT法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移活性的变化.采用双荧光素酶报告实验验证WIF1与miR-552的靶向关系.采用Western blotting检测各组β-catenin、Cyclin D1、APC的表达水平.结果 MG-63细胞中miR-552的表达水平为1.48±0.21,明显高于hFOB 1.19细胞的1.00±0.07 (P＜0.05).anti-552组miR-552的表达水平为0.51±0.12,低于空白对照组(P＜0.05);WIF1表达水平为1.45±0.23,高于空白对照组(P＜0.05).共转染组WIF1表达水平为0.68±0.13,低于空白对照组和anti-552组(P＜0.05).培养24、48、72和96 h后,anti-552组MG-63细胞增殖率分别为(83.14±4.25)％、(67.58±3.26)％、(53.41±3.25)％和(48.29±2.86)％,低于anti-NC组(P＜0.05).anti-552组MG-63侵袭、迁移细胞数分别为264±32和489±44,均少于空白对照组和anti-NC组(P＜0.05).双荧光素酶报告实验证实WIF1是miR-552的下游靶基因.anti-552组β-catenin、Cyclin D1、APC蛋白表达量分别为0.84±0.15、0.83±0.16和0.59±0.12,均低于空白对照组和anti-NC组(P＜0.05).而共转染组β-catenin、Cyclin D1、APC蛋白表达量分别为2.86±0.45、1.93±0.34和1.40±0.28,明显高于anti-552组(P＜0.05).结论 miR-552在骨肉瘤中表达上调,可通过靶向抑制WIF1的表达,异常激活Wnt/β-catenin信号,进而促使骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移.