抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达

摘要

目的构建表达抗 CEA小分子抗体 ,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建 CEA单链抗体基因 ,克隆入载体 p Kp L - 3a,在大肠杆菌中包涵体表达 ,EL ISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体 p SCMH,在大肠杆菌中表达 ,EL ISA检测活性。将 CEA嵌合抗体的轻链和 Fd基因克隆入杆状病毒表达载体 p Ac U W5 1中 ,在 sf9细胞中分泌表达 ,EL ISA检测活性及测定产量 ,竞争抑制 EL ISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性 ,产量为 1.7μg/m L,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗 C5 0识别相同的表位。结论该 CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子 ,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子 ;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。