杀虫剂甲萘威纳米抗体的制备及鉴定

摘要

为制备杀虫剂甲萘威特异性的纳米抗体,首先合成甲萘威完全抗原XH_3-KLH,免疫羊驼,然后提取外周血淋巴细胞中总RNA,PCR扩增获得羊驼重链抗体的可变区基因片段VHH,与噬菌粒载体pComb3X连接后电转化到E.coli ER2738感受态细胞中,构建了库容量为6.7×107cfu的纳米抗体文库。以XH3-BSA复合物为模板,经过四轮筛选,从构建的噬菌体展示纳米抗体库中淘选得到1种特异性结合甲萘威的纳米抗体C3-1,在大肠杆菌Top10F’中表达并纯化,经间接竞争的酶联免疫吸附分析法（enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）测定甲萘威的半数抑制质量浓度IC50为179.7μg/L。该纳米抗体为后续甲萘威的免疫分析方法建立以及环境样品检测提供了基础。