萝卜硫素对高糖诱导人肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响及机制

摘要

目的:研究萝卜硫素对高糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:将HK-2细胞分为正常组、高糖组、厄贝沙坦组(阳性对照,1μmol/L)和萝卜硫素低、中、高浓度组(10、20、40μmol/L),正常组细胞用DMEM完全培养基培养96 h,其余各组细胞均用高糖DMEM完全培养基(含40 mmol/L葡萄糖)培养48 h诱导细胞损伤后,再加入相应药物继续培养48 h.检测各组细胞的存活率、凋亡率以及细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)mRNA和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化腺苷一磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)蛋白的表达量.另将HK-2细胞分为正常组、高糖组、萝卜硫素高浓度组(40μmol/L)、阿卡地新组(AMPK激动剂,1 mmol/L)、萝卜硫素高浓度+compound C组(萝卜硫素40μmol/L+AMPK抑制剂compound C 40μmol/L)、哌立福辛组(Akt抑制剂,19.95μmol/L)、萝卜硫素高浓度+SC79组(萝卜硫素40μmol/L+Akt激动剂SC794μmol/L),同法培养后,检测细胞中p-mTOR、p-AMPK、p-Akt、p-PI3K蛋白的表达量.结果:与正常组比较,高糖组细胞的存活率以及细胞中cyclin D1、Bcl-2 mRNA和p-AMPK蛋白的表达量均显著降低(P0.05).与萝卜硫素高浓度组比较,阿卡地新组细胞中p-AMPK、p-mTOR蛋白和哌立福辛组细胞中p-mTOR、p-Akt、p-PI3K蛋白的表达量差异均无统计学意义(P>0.05);萝卜硫素高浓度+compound C组细胞中p-AMPK蛋白的表达量显著降低(P<0.05),p-mTOR蛋白的表达量显著升高(P<0.05);萝卜硫素高浓度+SC79组细胞中p-mTOR、p-Akt、p-PI3K蛋白的表达量均显著升高(P<0.05).结论:萝卜硫素可促进高糖诱导肾小管上皮细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能与上调p-AMPK表达,下调p-mTOR、p-Akt、p-PI3K表达有关.