不同产地蚕蛹的HPLC指纹图谱研究及多组分含量测定

摘要

目的:建立蚕蛹指纹图谱和多组分含量测定方法,为全面评价蚕蛹的质量提供参考.方法:以不同产地的18批蚕蛹为样品,采用高效液相色谱法(HPLC)进行测定.色谱柱为资生堂CAPCELL PAK C18 AQ S5,流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),检测波长为260 nm,柱温为30°C,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL.利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012年版)》进行HPLC指纹图谱分析及相似度评价,并通过与对照品色谱图比对进行色谱峰的指认;测定蚕蛹样品中尿嘧啶、鸟嘌呤、黄嘌呤、尿苷等4个核苷类成分的含量.结果:在18批蚕蛹样品的HPLC指纹图谱中确定了16个共有峰,指认了3号峰为尿嘧啶、6号峰为鸟嘌呤、7号峰为黄嘌呤、8号峰为尿苷;各样品图谱与对照指纹图谱的相似度为0.912～1.000.尿嘧啶、鸟嘌呤、黄嘌呤、尿苷分别在5.34～534、5.28～528、5.06～506、5.195～519.5μg/mL质量浓度范围内与其峰面积线性关系良好(r均不低于0.9998);检测限分别为0.0324、0.0320、0.0307、0.0312μg/mL,定量限分别为0.1068、0.1056、0.1012、0.1030μg/mL;精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于1.00％(n=6);平均加样回收率为100.15％～102.95％,RSD均小于2.00％(n=9).含量测定结果显示,不同产地蚕蛹中尿嘧啶、鸟嘌呤、黄嘌呤、尿苷的含量分别为0.41％～2.46％、0.37％～1.98％、0.72％～2.63％、0.94％～3.67％.结论:所建蚕蛹HPLC指纹图谱及其4个核苷类成分含量测定方法的专属性较强,且准确、可靠,可用于蚕蛹的质量评价及质量控制.