绿原酸抑制巨噬细胞激活的机制研究

摘要

目的 观察绿原酸对脂多糖(LPS)致巨噬细胞激活的影响,并探讨骨髓细胞2表达的触发受体(TREM2)蛋白在其中的作用。方法 为筛选LPS造模浓度,分别以1、10、100 ng/mL的LPS培养细胞24 h,检测细胞培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平和细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。为筛选绿原酸给药浓度,将细胞分为Control组、LPS处理组和3个不同浓度绿原酸(0.01、0.1、1μmol/L)干预组,检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β水平和细胞中iNOS、TREM2蛋白表达水平以及细胞活力。为观察TREM2在绿原酸抑制巨噬细胞激活中的作用,采用TREM2小干扰RNA(TREM2-siRNA)干扰细胞TREM2蛋白表达,将细胞分为Control组、LPS处理组、绿原酸+LPS组、TREM2-siRNA+绿原酸+LPS组和乱序-siRNA(SCsiRNA)+绿原酸+LPS组,在含有上述药物的培养基/空白培养基中孵育24 h后,检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平以及细胞中TREM2、iNOS和核因子κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达水平。结果 10 ng/mL LPS可显著促进细胞释放IL-6,并增加细胞中iNOS蛋白表达水平,故选择该质量浓度LPS进行后续实验。与LPS处理组相比,0.1μmol/L绿原酸干预组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平和细胞中iNOS蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),细胞中TREM2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞活力未受影响,故选择该浓度的绿原酸进行后续实验。在观察TREM2蛋白在绿原酸抑制巨噬细胞激活中的作用中发现,与Control组比较,LPS处理组细胞中iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与LPS处理组比较,绿原酸+LPS组细胞中iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低、TREM2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与绿原酸+LPS组比较,TREM2-siRNA+绿原酸+LPS组细胞中iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高、TREM2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),TREM2-siRNA明显逆转了绿原酸的上述作用;而SC-siRNA未对绿原酸产生的上述作用造成影响。结论 绿原酸可显著抑制LPS对巨噬细胞的激活,其抗炎作用可能是通过TREM2蛋白介导的。