HPLC测定炎症性肠病患者红细胞中6-硫鸟嘌呤核苷酸及6-甲巯基嘌呤的浓度

摘要

目的:建立HPLC法同时测定炎症性肠病(IBD)患者红细胞中硫唑嘌呤代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGNs)及6-甲巯基嘌呤(6-MMP)浓度,为硫唑嘌呤(AZA)个体化治疗提供依据.方法:红细胞经高氯酸沉淀,6-TGNs在酸性条件下加热水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),6-MMP水解生成4-氨基-5-(甲硫基)羰基咪唑(AMTCI),以5-溴尿嘧啶(5-BU)为内标,采用HPLC法测定其含量.色谱柱:Kromasil 100-5-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-20 mmol·L1磷酸二氢钾溶液(6:94),流速:0.8 ml·min-1,柱温:30°C;6-TG、6-MMP及5-BU检测波长分别为340,303,280 nm.10例IBD患者,口服AZA 50～100 mg·d-11个月以上,检测其6-TGNs及6-MMP浓度,焦磷酸测序检测TPMT基因型.结果:6-TG在8～800pmol﹒(8×108)-1 RBC浓度范围内线性关系良好(r=0.9940);低、中、高3个浓度的绝对回收率为63.24％～69.09％(n=5).AMTCI在250～16000 pmol·(8×108)-1 RBC浓度范围内线性关系良好(r=0.9978);低、中、高3个浓度的绝对回收率为85.17％～92.28％(n=5).10例患者TPMT均为野生型.1例患者6-TGNs浓度偏高,白细胞减少;2例患者6-MMP浓度较高,碱性磷酸酶轻度升高.结论:本方法专属性、精密度及稳定性较好,灵敏度高,适用于同时测定炎症性肠病患者红细胞中6-TGNs及6-MMP的浓度.