胃饥饿素对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后的保护作用及机制

摘要

目的 探讨胃饥饿素(ghrelin)对HK-2细胞缺氧/复氧的保护作用及机制.方法 以HK-2细胞为研究对象,建立缺氧/复氧模型,模拟肾缺血再灌注损伤过程.胃饥饿素预处理后,采用CCK-8试剂盒检测不同质量浓度胃饥饿素(0,12.5,25,50,100,200,400,800,1600 ng/mL)对缺氧/复氧及正常HK-2细胞活力的影响.将细胞分为正常对照组(N组),缺氧/复氧损伤组(H/R组),胃饥饿素(400 ng/mL)预处理组+缺氧/复氧损伤组(ghrelin+H/R组).造模成功后,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(WB)检测各组细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、P38促分裂素原活化蛋白激酶(P38)及磷酸化P38促分裂素原活化蛋白激酶(p-P38)的表达.结果 缺氧4 h,复氧12 h能有效诱导HK-2细胞缺氧/复氧损伤模型;与胃饥饿素质量浓度为0 ng/mL时相比,质量浓度为12.5,25,50 ng/mL时对缺氧/复氧损伤的HK-2细胞无影响;胃饥饿素质量浓度为100,200,400,800 ng/mL预处理能有效提高细胞活力(P<0.01),质量浓度为1600 ng/mL时HK-2细胞的活力开始降低;胃饥饿素质量浓度大于800 ng/mL对正常HK-2细胞活力有影响(P<0.05);与N组相比,H/R组细胞凋亡明显,ERK,p-ERK,P38及p-P38表达无差异;与H/R组相比,ghrelin+H/R组细胞凋亡水平下降,ERK,p-ERK,P38表达无差异,p-P38表达增高.结论 胃饥饿素预处理能对HK-2细胞缺氧/复氧损伤起到保护作用,可能是通过激活P38信号通路发挥其功能.