RNAi沉默rictor基因表达抑制人膀胱癌T24细胞体内外生长

摘要

背景与目的:膀胱癌是泌尿系统高发肿瘤,浅表性膀胱癌发展成为浸润性膀胱癌后,预后较差.该研究利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默rictor基因后,观察其对人膀胱癌T24细胞在体内外生长的影响.方法:构建3个rictor-RNAi表达载体(1#、2#和3#)和1个阴性对照载体.采用瞬时转染和稳定转染技术筛选出干扰效果明显的单克隆稳定细胞株.应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验、细胞划痕试验、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、裸鼠皮下移植瘤模型研究抑制rictor基因后对T24细胞生长的影响.结果:成功构建rictor-RNAi表达载体和阴性对照载体,瞬时转染T24细胞后,2#蛋白表达量下降最明显.利用2#载体稳定转染T24细胞,筛选2#一1、2#-2两株单克隆细胞.2#-1组和2#一2组细胞较空白组细胞生长减慢(P＜0.05).细胞划痕实验表明,2#-1组和2#-2组细胞的迁移速度也较空白组明显降低(p＜0.05).与空白组和阴性对照组相比,2#-1组和2#-2组G1期细胞比例增加(P＜0,05),细胞死亡率增加(P＜0.05).裸鼠皮下移植瘤模型显示,移植瘤的平均体积,2#-1组和2#-2组明显低于空白组和阴性对照组(P＜0.001).结论:成功构建rictor-RNAi稳定表达载体,可有效抑制rictor基因表达.抑制rictor基因表达能显著抑制T24细胞增殖,促进肿瘤细胞死亡,诱使细胞停滞在G1期,并能有效抑制裸鼠移植瘤的生长.RNAi抑制rictor基因的治疗策略可能为膀胱癌的治疗提供新的思路.