人RAG2基因5'近端染色质结构定量差异分析及可接近区域转录调控机制研究

摘要

目的 研究人类重组激活基因2(RAG2)5’近端染色质可接近区域调控RAG2表达的分子机制.方法 采用染色质可接近性实时聚合酶链反应(CHART-PCR)分析RAG2基因5’近端区域的DNase Ⅰ超敏位点(DHS),比较RAG阳性和阴性淋巴细胞以及非淋巴细胞的染色质开放状态变化.采用双荧光素酶报告基因分析DHS的转录调控活性,采用胶迁徙试验和染色质免疫沉淀试验证实GATA3的体外(in vitro)和在体(invivo)结合,采用PCR定点突变和显性负突变体技术证实GATA3对RAG2基因的调控作用.结果 人RAG2基因5’上游近端区域染色质在T与B细胞中处于不同的开放状态,RAG阳性T细胞的核心启动子活性与其特异性DHS相吻合.T细胞特异性转录因子GATA3结合于T细胞特异性DHS的高度保守区域,特异性上调报告基因及在体RAG2 mRNA在T细胞中的表达.结论 RAG2基因5’近端区域通过染色质开放状态变化调控基因表达的特异性.GATA3与高度保守的DHS区域结合,上调内源性人RAG2在T细胞中的表达.