人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M重组抗体制备及J链对其聚体形成的影响

摘要

目的 体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对IgM抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响.方法 从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合IgM表达载体,转染HEK 293F细胞进行表达.观察J链相关效应.结果 J链有利于抗体聚体形成(聚体占比由11.3％提升至75.5％),抗体效价由1:40提升至1:160;在37°C热稳定性实验及反复冻融实验中,TOX-IgM(J+)稳定性与TOX-IgM(J-)相当.通过酶联免疫吸附试验鉴定蛋白活性,本实验成功制备人鼠嵌合TOX-IgM抗体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳还原显示,重链大小约为75000,轻链大小约为25000,符合预期;效价、稳定性、基质效应均满足需求.结论 在连接链J链(15000蛋白)存在下,IgM抗体更易形成五聚体,即5个IgM单体通过二硫键和J链彼此之间相互连接,且经评价效价和稳定性均有了明显提升.