同时检测6种猪DNA病毒和RNA病毒的多重PCR方法的建立

摘要

本研究建立了单一和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和PCR程序,并鉴定了其检测猪单一和多重病毒感染的有效性。针对3种DNA病毒和3种RNA病毒设计特异性引物用于检测,包括古典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本脑炎病毒(JEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)。病毒DNA和RNA可通过一个核酸提取程序同时提取。多重PCR反应包括RNA病毒的逆转录和病毒cDNA、DNA的多重PCR两步。用该多重PCR方法对6种病毒混合物进行检测,每个反应可检测到450pg病毒基因组DNA或RNA,且无论对含单一病毒的样本或多种病毒不同组合的样本都有很好的特异性。39个样本同时用单一和多重PCR进行检测,其中30个采自4～12周龄仔猪的临床样本和流产胎儿的检测结果高度一致。由于其敏感性和特异性,该多重PCR将为猪DNA病毒和RNA病毒混合感染的临床诊断提供有效方法。