猪流行性腹泻病毒S蛋白的截短表达、活性检测及多克隆抗体制备

摘要

为高效表达猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白并制备特异性的多克隆抗体,本研究利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因主要抗原区域,将其亚克隆至pET30a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)表达菌,IPTG诱导表达重组蛋白,亲和层析法纯化重组蛋白,免疫印迹检测重组蛋白的活性,将重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测定其抗体效价.经BamH Ⅰ/HindⅢ双酶切鉴定获得了pET30a-S原核表达重组质粒,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导表达4h后,获得了以包涵体形式表达的重组S蛋白,重组S蛋白纯化后免疫印迹检测结果显示具有良好的活性和特异性,间接ELISA测定制备的兔抗S蛋白多克隆抗体的效价为1∶25600.本研究截短表达了PEDV S蛋白并制备了多克隆抗体,为进一步开发猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)免疫学快速检测试剂奠定了基础,为S蛋白的结构与功能的研究及抗原表位的鉴定提供了条件.