含环氧基亲水性固定化青霉素酰化酶共聚载体的合成与性能研究

摘要

环氧基团可以在温和条件下与酶分子的氨基反应使其固定于载体表面. 选用含有活性环氧基团的甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)和亲水性的N-乙烯吡咯烷酮(NVP)两种单体, 以N,N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)为交联剂, 甲醇水溶液作致孔剂, 液体石蜡为主介质, 通过反相悬浮聚合技术成功地合成了亲水性大孔GMA-NVP-MBAA三元共聚物载体(GNM). 通过调节交联剂的用量和单体NVP与GMA的比例, 可以调节载体的孔径、比表面积及在水中的溶胀性能. 将巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶共价偶联于平均孔径为16.5 nm、表面环氧基含量为0.906 mmol/g的GNM共聚物载体, 制成固定化酰化酶, 其表观活性高达625 U/g, 水解青霉素G钾盐的最适宜温度为50 ℃, pH值为8.0. 固定化酶在4 ℃保存40 d, 活性保持不变. 经3次使用后, 活性达到稳定值(601 U/g左右), 再经12次使用, 活性几乎保持不变.