流体动力学基因转染技术构建乙肝病毒HBx蛋白瞬时表达小鼠模型

摘要

目的:构建乙肝病毒HBx蛋白瞬时表达小鼠模型,为研究HBx在HBV感染相关原发性肝细胞癌发生中的分子机制奠定基础。方法:8只6~8周龄雄性CD-1小鼠,尾静脉注射真核表达质粒pc DNA-HBx及空载体pc DNA3.0,6~8 h处死小鼠并收集肝组织,抽提RNA及蛋白。RT-PCR和Western blot检测HBx表达情况;实时荧光定量PCR检测FXR靶基因SHP和Cyp7a1的m RNA表达。结果:核酸和蛋白水平上,pc DNA-HBx注射组小鼠肝脏内均可检测到HBx的表达;空载体对照组肝组织中未检测到HBx的表达;肝组织中瞬时过表达的HBx可以有效调控FXR通路下游靶基因SHP和Cyp7a1的m RNA表达。结论:成功实现了HBx在小鼠肝脏中的瞬时高表达,为今后整体水平上研究HBx提供了有效的动物模型。