老黄酶和甲酸脱氢酶催化柠檬醛不对称还原生成香茅醛的条件优化

摘要

源自酿酒酵母的老黄酶基因oye2和源自假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdhcb分别成功地在大肠杆菌BL21 (DE3)中过量表达.重组表达的老黄酶OYE2和甲酸脱氢酶FDHCB经Ni-NTA亲和层析获得相应的纯酶.以这两种纯酶构建不对称还原柠檬醛生成香茅醛的催化体系,并优化了其反应条件.优化后的反应体系含有25 mmol/L柠檬醛,100 mmol/L甲酸钠,0.42mg/mL老黄酶OYE2,0.2 U/mL甲酸脱氢酶FDHCB,0.5 mmol/L NAD+以及50 mmol/LPIPES缓冲液(pH 7.0).在pH 7.0和30 ℃下反应10 h,香茅醛得率达92.0％,与没有甲酸脱氢酶辅助辅酶循环时的得率(9.8％)相比,香茅醛得率提高了约9.4倍.