新型冠状病毒(SARS-CoV-2)N蛋白C端重组蛋白的原核表达、纯化及应用

摘要

通过原核表达系统探究SARS-CoV-2核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白C端重组蛋白表达、纯化的制备方式以及提供有效的重组蛋白用于COVID-19的早期快速诊断.合成N蛋白C端基因序列,构建重组载体,利用原核系统表达重组目的蛋白.利用Ni2+亲和层析和凝胶过滤层析的方法对表达产物进行纯化,SDS-PAGE电泳和高效液相色谱鉴定重组蛋白的纯度.通过Western blot验证目的蛋白生物活性,用纯化的重组蛋白作为包被抗原,核衣壳全长蛋白标记荧光微球,组装成荧光免疫层析试纸条检测PCR确证的阳性和阴性血清样本.成功构建重组载体pET21b-NC,工程菌株在37°C诱导条件下,80％目的蛋白以可溶形式表达.通过Ni2+亲和层析和凝胶过滤层析,目的蛋白纯度高达90％以上,利用重组蛋白组装荧光免疫层析试纸,该试纸条可区分阴阳血清.SARS-CoV-2 N蛋白C端可在大肠杆菌中以可溶性形式表达,高纯度的目的蛋白在荧光免疫层析检测试纸中表现出较好的反应原性和特异性,可初步用于COVID-19的早期初筛.