尿激酶催化结构域S356A突变体在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶

摘要

采用定位突变和重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域基因片段,将其克隆至表达载体pPICZαA上,转化毕氏酵母X-33。重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化、凝胶层析柱检测,纯度达到99%以上,该重组的尿激酶催化结构域(C279A/N302Q/S356A)不具有丝氨酸蛋白酶活性。用气相扩散法获得蛋白晶体,其衍射分辨率达1.77(?),结构解析发现在其复合物结构中有三个抑制剂分子苯甲醚。