人gdnf基因的克隆及牛β-酪蛋白基因座定位整合载体的构建

摘要

用分子克隆技术构建人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,用于制备生产人GDNF的牛乳腺生物反应器.打靶载体以牛β-casein基因上游和下游5.7 kb序列为5′和3′同源臂;neo抗性基因为正筛选因子;HSV-tk基因和DsRed2基因为双负筛选因子;人gdnf基因置于5′同源臂下游,SV40 polyA序列插入到人gdnf基因下游作为人gdnf基因转录终止信号.经PCR、限制性内切酶图谱及DNA测序分析鉴定,结果表明已成功地构建了人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,为研究人gdnf基因在牛β-casein基因座的定点整合及通过体细胞核移植法制备人GDNF牛乳腺生物反应器的研究奠定了基础.