利用简并引物克隆天山雪莲sikPIP基因片段及RNAi载体的构建

摘要

利用NCBI、Bloekmaker、CODEHOP、Primer Premier 5.0等数据库和生物软件设计简并引物并利用简并引物RT-PCR,首次从天山雪莲中克隆到474 bp的PIP基因cDNA片段,命名为sikPIP,其与GenBank中非洲杂交菊PIP基因氨基酸序列的同源性高达93.0%.从上述序列中选取200 bp的序列,利用2对同尾酶将正义片段和反义片段插入到植物表达载体CAM2300-35S-Ocs中,成功构建天山雪莲RNAi载体CAM2300-35S-Ocs-sikPIP.为接下来的遗传转化,进一步探明sikPIP基因在天山雪莲中的功能奠定了基础.