HCN4转染大鼠骨髓间充质干细胞重建起搏离子通道If

摘要

目的 研究慢病毒载体介导超极化激活的环核苷酸门控通道基因4(HCN4)转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)重建起搏离子通道的可行性. 方法 全骨髓法分离大鼠股骨及胫骨的MSCs,流式细胞术鉴定rMSCs;应用四质粒表达系统构建包含目的 基因HCN4的慢病毒载体lentiV-HCN4-GFP,对照组慢病毒载体为仅含有报告基因GFP的慢病毒载体lentiV-GFP;慢病毒载体转染rMSCs;RT-PCR及荧光显微镜检测HCN4在rMSCs中的mRNA及蛋白表达;电压钳检测阳性转染细胞的起搏电流的特点. 结果 HCN4基因转染MSCs的阳性率约60%;实验组RTPCR产物出现480bp的目的 条带;阳性转染细胞中可记录到明显的时间和电压依赖性的超极化激活内向电流(If),激活的阈电压为-80mV,该电流对低浓度CS+敏感;对照组未检测到相应的mRNA表达和超极化激活的电流. 结论 慢病毒载体能够介导HCN4基因高效转染MSCs,表达为起搏离子流通道.