Reprogrammed CRISPR-Cas9 targeting the conserved regions of HPV6/11 E7 genes inhibits proliferation and induces apoptosis in E7-transformed keratinocytes

摘要

人的乳头状瘤病毒(HPV ) 的低风险的类型(类型 6 或类型 11 ) 的坚持感染是生殖器的肉赘的主要原因。在处理以后给复发的高率，一个新分子的代理人的使用肯定具有价值。这研究的目的是用定期聚类的 reprogrammed 在 keratinocytes 完成病毒的 E7 基因的指向的 inactivation interspaced 短 palindromic 重复(CRISPR )/CRISPR-associated (Cas ) 9 系统。完成这，为指向两 HPV6/11 E7 基因的一个通用 CRISPR-Cas9 系统被使用双指南 RNA 向量构造。在进 E7-transfromed keratinocytes 的向量的 transfection 以后， E7 蛋白质的表示水平用西方污点的分析被测量， E7 基因的顺序用定序的 Sanger 是坚定的。房间增长被 CCK-8 试金分析，并且房间 apoptosis 被 Hoechst 33258 染色，流动 cytometry 分析和 ELISA 试金评估。结果显示两 HPV6/11 E7 基因能被单个 CRISPR-Cas9 系统使失去活性。而且， E7 的 silencing 在 E7-transfromed keratinocytes 然而并非在正常 keratinocytes 导致了房间增长和 apoptosis 的正式就职的抑制。我们的数据建议 reprogrammed CRISPR-Cas9 系统为生殖器的肉赘为辅助治疗的开发有潜力。