枇杷叶提取物通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路减轻脂多糖诱导的肺细胞损伤

摘要

目的探讨枇杷叶提取物对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制。方法2019年6月至2020年7月,采用LPS诱导的A549细胞建立肺损伤模型(LPS组),同时将正常培养的细胞作为对照组。不同剂量(1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L)的枇杷叶提取物处理细胞(LPS+枇杷叶-L组、LPS+枇杷叶-M组、LPS+枇杷叶-H组),添加磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂LY294002与枇杷叶提取物处理细胞(LPS+枇杷叶-H+LY294002组);采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛的含量;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白蛋白表达量。结果与对照组比较,LPS组吸光度[(1.38±0.06)比(0.55±0.02)]及SOD的含量[(81.66±5.36)U/L比(14.65±1.06)U/L]降低,凋亡率[(6.41±0.25)%比(27.43±1.00)%]、Bax蛋白水平及LDH[(242.86±6.09)U/L比(875.92±15.01)U/L]、丙二醛[(121.55±3.17)μmol/g比(424.46±6.48)μmol/g]的含量升高,Bcl-2、p-PI3K[(0.60±0.04)比(0.13±0.01)]、p-Akt[(0.51±0.04)比(0.09±0.01)]蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,LPS+枇杷叶-M组、LPS+枇杷叶-H组吸光度[(0.55±0.02)比(0.86±0.03)、(1.18±0.05)]及SOD[(14.65±1.06)U/L比(36.84±2.08)U/L、(70.97±3.03)U/L]的含量升高,凋亡率[(27.43±1.00)%比(22.24±0.81)%、(14.78±0.49)%]、Bax蛋白水平及LDH[(875.92±15.01)U/L比(641.95±9.81)U/L、(365.47±7.02)U/L]、丙二醛[(424.46±6.48)μmol/g比(277.94±6.90)μmol/g、(156.30±3.26)μmol/g]的含量降低,Bcl-2、p-PI3K[(0.13±0.01)比(0.32±0.01)、(0.54±0.03)]、p-Akt[(0.09±0.01)比(0.25±0.02)、(0.42±0.03)]蛋白水平升高,均差异有统计学意义(P<0.05);添加LY294002可明显逆转枇杷叶提取物对LPS诱导的A549细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论枇杷叶提取物可通过激活PI3K/Akt信号通路减轻LPS诱导的A549细胞增殖抑制、凋亡和氧化应激效应,为探究枇杷叶治疗细菌感染引起的急性肺损伤提供依据。