重组pAd/CMV/V5-DEST-p16载体的构建及其对人肝癌细胞的抑制作用

摘要

目的 构建pAd/CMV/V5-DEST-p16重组腺病毒载体,并观察野生型p16基因对人肝癌细胞SMMC7721株的抑制作用.方法 合成人p16-INK4表达基因.构建pENTR 1A-p16质粒.通过LR反应,入口克隆pENTR 1A-p16质粒的外源性合成的修饰后篌的p16 eDNA,取代目的载体pAd/CMV/V5-DEST中的cc曲基因,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-p16.测序证实质粒含有目的基因.PaeI酶切后的重组腺病毒载体,通过脂质体2000介导,转染293A细胞,产生缺陷性的重组腺病毒.Western blot分析显示在由重组腺病毒介导的野生型p16基因在肝癌细胞SMMC7721中能够表达蛋白.被感染的细胞的生长受抑制.结果 构建了重组p16腺病毒载体,产生缺陷性的重组腺病毒,野生型p16基因对人肝癌细胞SMMC7721株有抑制作用.结论 用通路克隆系统构建重组p16腺病毒载体稳定、可靠、方便,腺病毒能够介导野生型p16基因在肝癌细胞中表达,并抑制细胞的生长.