抗氧化反应元件信号通路调控胆囊癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨血根碱调控胆囊癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的分子机制。方法 于2018年1月至2019年9月体外培养人胆囊癌细胞GBC-SD,用不同浓度(2、4、8μmol/L)的血根碱处理48 h。MTT法检测细胞增殖抑制率;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,应用多功能酶标仪检测丙二醛、还原型谷胱甘肽(GSH)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)与Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路相关蛋白Keap1、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)的表达量。结果 与空白组相比,血根碱不同浓度组细胞增殖抑制率[(2.07±0.68)%比(12.49±1.53)%、(23.08±2.64)%、(44.67±3.68)%]显著升高(P<0.05),迁移细胞数[(243.19±15.48)个比(146.34±12.56)个、(98.85±9.82)个、(75.79±7.37)个]与侵袭细胞数[(136.68±8.37)个比(97.43±7.15)个、(46.65±5.34)个、(38.15±4.53)个]显著减少(P<0.05),PCNA、Ki-67、MMP-2、MMP-9表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(3.62±0.63)%比(8.59±1.02)%、(14.16±1.14)%、(18.84±1.65)%]显著升高(P<0.05),cleaved-caspase-3表达量显著升高(P<0.05);与空白组相比,血根碱低浓度组、血根碱中浓度组、血根碱高浓度组活性氧、丙二醛水平显著升高(P<0.05),SOD活性与GSH含量显著降低(P<0.05),Keap1、Nrf2、HO-1表达量显著降低(P<0.05)。结论 血根碱可能通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路从而抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。