猪传染性胃肠炎病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及在疫苗评价中的应用(英文)

摘要

[目的]建立检测猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus．TGEV）的TaqMan荧光定量PCR方法。[方法]根据TGEV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针，以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品，进行定量PCR反应。[结果]该试验建立的荧光定量PCR方法在10^2～10^10拷贝／μl之间具有良好的线性关系，相关系数达到0．99以上．扩增效率在90％～110％之间。该方法的检测灵敏度为10拷贝，敏感性较高．而且特异性较好，与猪的其他病毒核酸均无交叉反应；批内和批间的变异系数低于3％．表明该方法的重复性较好。应用该方法可以对疫苗的免疫效力进行定量检测和评价．也可以对临床病料进行检测。[结论]该研究建立的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好，可为TGEV的流行病学调查、疫苗开发和发病机制等研蜜檬供可靠的工具。