食管癌细胞株Eca109中cdc42基因启动子区CpG岛甲基化调控报告基因的表达

摘要

目的 研究细胞周期分裂蛋白42(cdc42)的启动子区CpG岛是否作为调节因子参与基因表达的调控.方法 选择消化道肿瘤早期相关基因cdc42为研究对象,构建氯霉素乙酰基转移酶3-增强子(pCAT3-Enhancer)重组体:内含cdc42基因启动子区第一个CpG岛的序列及一段不含CpG岛序列,非甲基化修饰的重组体和pCAT3-Enhancer空载体转化至甲基化酶缺陷大肠杆菌中(ER1793),经甲基化酶修饰后的重组体及空载体转化至可持续甲基化状态的大肠杆菌中(JM109),阳性克隆转染至Eca109中,提取蛋白,通过薄层层析检测氯霉素乙酰基转移酶(CAT)活性.结果 转染至细胞株后,甲基化空载体CAT的活性显著低于非甲基化的;任意DNA-pCAT3-Enhancer重组体甲基化及非甲基化CAT的活性无差异;cdc42启动子区CpG岛-pCAT3-Enhancer重组体,甲基化CAT的活性显著低于非甲基化CAT的活性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过食管癌细胞株Eca109实验,cdc42启动子区CpG岛的甲基化修饰后,CAT的活性降低,非甲基化CAT仍保持较高活性.说明cdc42启动子区CpG岛甲基化程度的改变具有调节下游基因表达的作用.