稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株的构建

摘要

目的 应用RNA干扰技术降低前列腺癌DU145细胞株Raptor基因表达水平,并建立稳定转染细胞株.方法 针对Raptor基因设计合成siRNA,鉴定、测序正确后转染293T细胞观察基因表达情况；构建Raptor-shRNA慢病毒载体；进行Raptor-shRNA慢病毒包装及滴度测定；筛选稳定表达Raptor-shRNA的前列腺癌DU145细胞株；Western blot检测稳定转染细胞中的Raptor表达水平.结果 Raptor-shRNA成功转染前列腺癌DU145细胞后,通过嘌呤霉素筛选,获得了Raptor基因沉默的DU145细胞株,Western blot检测证实该细胞株的Raptor表达水平明显低于对照组(P＜0.01).结论 成功构建稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株,为后续研究奠定了基础.