毛壳霉内切菊粉酶的纯化与性质

摘要

毛壳霉(Chaetomium sp.)C34发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素11离子交换层析、Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200 凝胶过滤、Phenol SepharoseTM HP疏水层析,得到电泳纯的内切菊粉酶组分,纯化倍数为30.8倍,活力回收率为7.7%.用SDS-PAGE测得该酶亚基的分子量为66kD.菊粉酶的最适pH为6.0,最适温度为50～55℃.菊粉酶在50℃以下,pH5.0～8.0时较稳定.Cu2+完全抑制酶的活性,Mn2+、Zn2+、Fe2+、EDTA以及NBS(N-bromosuccinimide, N-溴代丁二酰亚胺)对该酶有很强的抑制作用.该酶对菊粉有较强底物专一性,产物主要为低聚果糖,也可作用于蔗糖,I/S值为20.以菊粉为底物时,Km为0.199mmol/L,Vmax为115μmol/(mg·min).