假单胞菌M18转录调节因子σs基因与无启动子lacZ基因融合突变株的构建和鉴定

摘要

通过菌落原位杂交和Southern杂交,从假单胞菌M18基因组文库中克隆了rpoS基因及相邻序列.为了深入研究影响rpoS基因表达的调控因素,运用同源重组技术,将无启动子β-半乳糖苷酶基因(-′lacZ)插入并融合于rpoS基因中,构建了假单胞菌M18 rpoS基因突变株M18SZ.Miller法测定显示,突变株M18SZ的β-半乳糖苷酶可高达480U,而野生株检测不到β-半乳糖苷酶活性.表明,突变株中的rpoS基因与无启动子β-半乳糖苷酶基因已融合并且表达.在KMB培养基中生长量测定(OD600)的结果表明,突变株与野生株生长存在显著差异.