猪链球菌国内分离株精氨酸脱亚氨酶的克隆表达及其活性分析

摘要

根据GenBank上精氨酸脱亚氨酶(arginine deiminase,AD)序列AF546864,设计并合成一对引物,用PCR检测29株猪链球菌和7株马链球菌兽疫亚种的ad基因,发现29株猪链球菌均能检出此基因,而7株马链球菌兽疫亚种均未检出.扩增出的猪链球菌2型(SS2)强毒株HA9801的ad基因片段,定向克隆至pBAD/Myc-HisC严紧型质粒并转化TOP10.阳性重组菌经L-阿拉伯糖诱导,表达出分子量约47000Da的重组蛋白.经镍柱亲和层析,获得纯化的重组酶.活性分析显示,该酶具有巯基酶和金属酶的特征,其最适反应温度为37℃,最适pH值为6.5.Western blot分析显示,该酶能与SS2-HA9801全菌制备的兔抗血清发生特异性反应,表明其具有一定的免疫原性.检测该酶有助于进一步分析猪链球菌可能的毒力因子.