台勾霉素生产菌指孢囊菌NRRL 18085遗传操作体系的建立

摘要

[目的]建立新型大环内酯类抗生素台勾霉素的生产菌指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum NRRL18085的遗传操作体系,实现台勾霉素相关生物合成基因的敲除突变.[方法]以整合型质粒pSET152为载体,建立了外源DNA通过接合转移进入指孢囊菌NRRL 18085的操作方法和培养条件,利用PCR-targeting系统在体外构建了一个台勾霉素卤化酶基因敲除的cosmid质粒,通过接合转移转入到指孢囊菌NRRL18085野生菌中.[结果]获得了台勾霉素卤化酶基因敲除的指孢囊菌NRRL 18085的双交换突变株,该突变株失去了产生台勾霉素的能力.[结论]成功建立和优化了指孢囊菌NRRL 18085菌株的遗传操作体系,使得在体内分析和鉴定台勾霉素生物合成基因的功能成为可能,同时也为建立其他类似放线菌的遗传操作体系提供了参考.