敲除Spt7对黑曲霉生长及菌落形态的影响

摘要

在酵母中Spt7作为一种多功能蛋白复合物Spt-Ada-Gcn5-乙酰转移酶(Spt-Ada-Gcn5-acetyltransferase,SAGA)复合体的核心蛋白,其不仅负责维持SAGA复合物的稳定,还负责细胞内10%以上的基因转录。除此之外,丝状真菌中关于Spt7功能的研究很少。【目的】探究Spt7在黑曲霉Aspergillus niger CGMCC 1062中的功能。【方法】以黑曲霉A.niger CGMCC 1062为出发菌株,通过农杆菌转化法将敲除spt7基因的质粒转入黑曲霉中;并分别将Δspt7菌株与对照组点种在CM培养基、不同碳源及含H2O2培养基上进行生长观察;通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析糖酵解关键基因、产孢相关基因的相对转录水平。【结果】成功获得spt7基因敲除菌株Δspt7;通过实验发现Δspt7菌株较对照菌株生长缓慢、菌落变白且产孢延迟;spt7基因的敲除显著影响菌株对不同碳源的利用;但Δspt7菌株同对照组均能在20 mmol/L H2O2的平板上正常生长。Δspt7菌株中糖酵解关键酶fbp、pfk、trk、pks、fda和gsdA基因的转录水平较对照组分别下调了2.65、4.46、6.05、4.90、3.20和3.20倍;产孢相关基因wetA、abaA和brlA的转录水平相较于对照组分别下调了529.93、172.40倍和9.61倍。【结论】spt7基因的缺失影响菌株的正常生长、菌落形态及分生孢子产生。