一株产右旋糖酐酶青霉的分离及酶的纯化和性质

摘要

【目的】从土壤中筛选到一株新的产右旋糖酐酶的真菌F1001,为酶法制备药用级右旋糖酐提供新的右旋糖酐酶产生菌株。【方法】通过形态特征和ITS rDNA序列分析方法鉴定菌株。利用硫酸铵盐析、Sepharose 6B凝胶柱纯化,得到纯度较高的酶蛋白。以右旋糖酐70 kDa为底物,对右旋糖酐酶酶学性质及催化机理进行研究。【结果】经过鉴定确定菌株F1001为棘孢青霉(Penicillium aculeatum)。通过SDS-PAGE测得棘孢青霉右旋糖酐酶的分子量为66 kDa左右。酶促反应的最适温度为35℃,最适pH为5.0,酶在pH 4.0-7.0和50℃以下稳定。酶的最适底物浓度为3%,酶催化水解右旋糖酐的主产物为异麦芽糖,确定该酶为内切右旋糖酐酶,并且只对连续的α-1,6葡萄糖苷键起作用。酶的Km值为3.55×10-5 mol/L,Vmax=4.29×10-2 mol(葡萄糖)/min.L。Cu2+和Zn2+对酶活有较强的促进作用,低浓度的Cu2+使酶活力提高到134.7%,Mn2+对酶催化活力抑制作用较强。【结论】筛选得到一株新的右旋糖酐酶的产生菌F1001,产生的右旋糖酐酶活性高、稳定性较好。为该酶进行催化反应和工业应用提供了重要参数。