CEA-TCB双特异性抗体cibisatamab增强T细胞对胃癌类器官的免疫杀伤作用

摘要

目的 研究T细胞联合CEA-TCB双特异性抗体cibisatamab对胃癌的作用.方法 采用H2B-mCherry慢病毒感染人胃癌原代细胞,体外3D培养建立人胃癌类器官;用流式细胞仪检测人胃癌组织及其类器官中癌胚抗原(CEA)的表达情况;用流式细胞仪从健康人外周血中分离出CD8+T细胞并与人胃癌类器官进行体外共培养;采用红色荧光蛋白(mCherry)的融合度分析检测类器官的生长情况;用流式细胞仪从类器官中分选出不表达CEA(CEA-/lo)和表达CEA(CEA+)的细胞亚群,体外增殖实验比较T细胞与cibisatamab联合作用对两者增殖的影响,流式细胞仪检测T细胞联合cibisatamab作用对两者细胞凋亡的影响;采用荧光定量PCR比较两者CD133、CD44和Lgr5基因的表达水平;体外成球实验比较两者自我更新能力,小鼠体内有限稀释成瘤实验比较两者的成瘤能力.结果 流式检测结果显示,人胃癌类器官具有和亲代胃癌组织相似的CEA表达率,不同人胃癌类器官中CEA表达具有异质性;T细胞联合cibisatamab治疗后,残留的类器官细胞中CEA-/lo细胞比例均显著上升;生长曲线显示,CEA表达水平低的胃癌类器官对T细胞联合cibisatamab作用敏感性显著低于高表达CEA的类器官,CEA-/lo细胞对T细胞联合cibisatamab作用敏感性显著低于CEA+细胞;流式检测凋亡显示,CEA+细胞经T细胞和cibisatamab联合处理后凋亡细胞比例更高;荧光定量PCR显示,CEA-/lo细胞中CD133、CD44和Lgr5 mRNA表达量显著高于CEA+细胞;体外成球实验显示,CEA-/lo细胞形成细胞球体量显著高于CEA+细胞;体内有限稀释成瘤实验显示,CEA-/lo细胞较CEA+细胞显著富集可成瘤细胞.结论 CEA-TCB双特异性抗体cibisatamab可以增强T细胞对胃癌类器官的免疫杀伤,其作用效果与CEA的表达率呈正相关;不表达CEA的细胞是对T细胞联合cibisatamab治疗耐药的细胞亚群,且富集肿瘤干细胞,是导致免疫治疗后复发的主导细胞亚群.