人膜联蛋白Ⅴ的表达及核素标记

摘要

目的构建人膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)表达载体并诱导其表达,应用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)偶联后应用核素99mTc标记.方法 PCR扩增含Annexin Ⅴ编码基因序列,将扩增产物克隆至His融合表达载体pET-28a(+),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导His融合Annexin Ⅴ的表达,应用Ni-NTA Superflow纯化并经测序、SDS-PAGE及Western blot确证.表达的蛋白通过HYNIC偶联后进行99mTc标记,考察标记物的特性.结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致.对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的Annexin Ⅴ基因编码序列一致.在IPTG诱导下,经Western blot及SDS-PAGE证实,重组大肠埃希菌DH5α高效表达分子量约36 kD的目的产物.99mTc-HYNIC-Annexin Ⅴ标记率及放化纯均达到90%以上,稳定性在6 h以上,可以满足核素显像的要求.结论人Annexin Ⅴ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a(+)上,并在大肠埃希菌DH5α中高效、大量表达.经HYNIC偶联后99mTc标记,可以得到较高的标记率和放化纯.99mTc-HYNIC-Annexin Ⅴ有望成为一种有良好临床应用前景的凋亡显像剂.