成熟型Smac真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞中的表达

摘要

目的构建成熟型Smac基因真核表达载体,探讨成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡的可能性.方法以Xba Ⅰ和BamHⅠ双酶切质粒pET15b-Smac,回收酶切释放基因片断,定向插入以XbaⅠ和BamH Ⅰ双酶切的真核表达质粒pcDNA3.1(-)中,构建含有成熟型Smac基因的真核表达载体pcDNA-MT Smac,测序鉴定重组的质粒.构建的质粒转染膀胱癌T24细胞,在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导下以原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测凋亡率.结果以T7引物测序证实重组的质粒pcDNA-MT Smac含有成熟型Smac基因.空白对照组、50 ng/mlTRAIL处理组、转染Smac组和转染Smac后50 ng/ml TRAIL处理组的凋亡率分别为1.6%、20.2%、1.7%和35.7%,未经TRAIL诱导,T24细胞及转染了成熟型Smac的T24细胞间凋亡率差异无显著性意义(P＞0.05),然而在TRAIL的诱导下,转染了成熟型Smac的T24细胞凋亡率明显高于未转染细胞,其差异有极显著性意义(P＜0.01).结论成功构建了含有成熟型Smac基因的真核表达载体,并证实该基因可以促进TRAIL诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡,为研究成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡提供了实验依据.