杜氏盐藻β-酮酯酰-ACP合酶(DsKASⅡ)基因的分离及功能分析

摘要

β-酮脂酰-ACP合成酶Ⅱ(KASⅡ)是催化棕榈酸(16∶ 0-ACP)延伸为硬脂酸(18∶ 0-ACP)的关键酶,其活性强弱决定着18碳脂肪酸含量的高低.本文以杜氏盐藻(Dunaliella salina)为试材,分离鉴定杜氏盐藻DsKASⅡ基因编码序列,采用生物信息学工具解析DsKASⅡ酶蛋白的亚细胞定位、高级结构、理化性质及系统发育等特性.检测氮胁迫下的DsKASⅡ表达量,以及藻细胞脂肪酸、叶绿素和β-胡萝卜素的含量.结果 表明,DsKASⅡ编码的酶蛋白长度为476 aa,pI为6.99,含叶绿体靶向肽和较多亲水区.二级结构主要由α-螺旋(22.48％),β-片层(22.06％)和无规则卷曲(55.46％)组成.三级结构预测表明该蛋白整体呈紧密的心形结构,活性酶蛋白为同源二聚体.系统发育分析表明,DsKASⅡ氨基酸序列与莱菌衣藻CrKASⅡ同源性达99％,可能二者有着共同的进化祖先.qRT-PCR揭示,与正常培养的杜氏盐藻相比,DsKASⅡ在氮胁迫条件下的表达量明显上调,第3天时的表达量比正常培养的高4.5倍.氮胁迫下藻细胞总油脂、油酸(C18∶1)和类胡萝卜素含量显著提高,然而棕榈酸(C16∶0)和叶绿素的含量明显降低.这表明,氮胁迫诱导杜氏盐藻DsKASⅡ基因上调表达,将更多的棕榈酸催化为硬脂酸,进而提高了单不饱和油酸的富集以及类胡萝卜素的积累.本研究为后续进一步解析杜氏盐藻氮胁迫条件下,油脂与胡萝卜素合成积累及藻细胞响应胁迫机制和优质富油藻种培育提供了科学参考.