对强抗逆植物蒙古沙冬青2个脂肪酸去饱和酶基因AmFAD7和AmFAD8的功能进行了初步研究.结果表明:(1)AmFAD7和AmFAD8的编码蛋白分别含455和457个氨基酸残基.(2)半定量RT-PCR分析显示,在野外生长植株的嫩叶中,A m FA D7表达量在夏季很低、冬季较高,春秋两季略低于冬季,而A m FA D8在春秋两季和初冬时表达量高于其他月份;在低温(4℃～-6℃梯度降温)处理2～48 h的幼苗中,A m FA D7的表达呈先降低后升高的变化趋势,而A m FA D8的表达比处理前略有上调;在高温(42℃)处理2～48 h的幼苗中,2个基因的表达均被抑制,尤其对A m FA D7的抑制较为迅速而且明显;在干燥处理2～48 h的幼苗中,A m FA D7的表达量有较明显的升高,而A m FA D8则略有降低.(3)成功构建了2个基因的植物表达载体(p3300-35S-A m FA D7和p3300-35S-A mFA D8)并转化拟南芥,分别获得18和16个转基因株系.RT-PCR检测表明,其中F7-1和F7-2以及F8-1～F8-4转基因株系中目的基因的表达量均较高.(4)相对电导率分析显示,在正常温度下,A m FA D7转基因株系(F7-1和F7-2)的相对电导率与野生型无显著差异;在低温(-1℃)胁迫24 h后,F7-1和F7-2的相对电导率(分别为32.8％和36.1％)显著低于野生型(48.5％),而在高温(37℃)胁迫24 h后,F7-1和F7-2的相对电导率(分别为44.7％和41.9％)显著高于野生型(33.2％).研究表明,A m FA D7在转录水平受低温和干燥胁迫的诱导,但被高温胁迫抑制,而AmFAD8的转录受低温诱导但被干燥和高温胁迫抑制;在拟南芥中组成型表达AmFAD7增强了转基因植株在低温胁迫下细胞膜的稳定性及其耐冻性,但却增加了其在高温胁迫下的细胞膜损伤程度和热敏感性.
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