小麦Glu-D3和Glu-B3位点LMW-GS基因特异引物设计与PCR扩增

摘要

用CTAB法提取小麦基因组DNA,根据GenBank中公布的已知LMW-GS基因序列,设计并合成染色体位点特异PCR引物1～7;利用特殊小麦材料--六倍体普通小麦阿勃二体、1A、1B和1D缺体,四倍体小麦及二倍体的一粒小麦和节节麦的基因组DNA为模板,在优化的PCR体系下进行特异性扩增和引物验证.结果表明:引物3和引物4为小麦谷蛋白Glu-D3位点LMW-GS基因特异PCR引物,用其进行扩增时,循环反应条件为:94℃变性1 min, 62℃退火1 min,72℃延伸2 min.扩增产物大小约1.60 kb,包括了启动子和完整编码区.引物5和7为小麦谷蛋白Glu-B3位点LMW-GS基因特异PCR引物,用其进行扩增时,循环条件为:94℃变性1 min,64℃退火1 min,72℃延伸2 min.扩增产物大小约1.45 kb左右,包括了启动子和完整编码区.此外,用引物3和4通过PCR技术克隆到小偃6号小麦Glu-D3位点LMW-GS基因(登录号为AY263369);该基因编码的LMW-GS含9个Cys残基.这是首次发现含9个Cys残基的LMW-GS基因.它可能是小偃6号加工品质优良的主要原因之一.