超声介导胰酶抑制剂温敏凝胶局部给药治疗胰腺损伤的研究

摘要

目的: 探讨超声造影引导胰酶抑制剂甲磺酸加贝酯温敏凝胶(GMTI)局部注射治疗胰腺损伤的可行性及有效性。
　　材料与方法: (1)将泊洛沙姆407、甲磺酸加贝酯（GM，包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml组）及甲磺酸加贝酯温敏凝胶（GMTI，包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml组）分为9组，分别吸取各组样品25μl与等体积胰蛋白酶溶液（1.0mg/ml）混匀用作待测溶液，根据大鼠胰蛋白酶ELISA检测试剂盒所述步骤检测并评估GMTI体外抑制胰蛋白酶活性的有效浓度。(2)42只大鼠随机分为对照组、模型组、GM组、GMTI组（包括1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml组），每组6只。除对照组外，余大鼠麻醉后开腹统一制作Ⅱ级胰腺损伤模型。GMTI组于病灶处直接注射对应浓度的药物(0.3ml/100g)，GM组经大鼠尾静脉注射GM(0.3ml/100g)，模型组于病灶处注射等量0.9％生理盐水。术后24h处死大鼠并收集血液及胰腺组织，分离血清后按照大鼠血清淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP)、胰蛋白酶原激活肽(TAP) ELISA检测试剂盒所述步骤检测各指标水平，胰腺组织固定后行病理学检测。(3)42只大鼠随机分为对照组、模型组（包括1h、6h、24h组）、GMTI组（包括1h、6h、24h组），每组6只。除对照组外，麻醉后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型。GMTI组于病灶处直接注射药物(10mg/ml，0.3ml/100g)，模型组于病灶处直接注射等量0.9％生理盐水。术后分别于1h、6h、24h处死大鼠并收集血液及胰腺组织，记录腹腔积液量，使用大鼠ELISA检测试剂盒测定血清AMS、CRP、脂肪酶(LPS)、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，胰腺组织固定后行病理学检测。(4)5只比格犬，全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型，将十二指肠降段间断固定于右侧腹壁。分别于术后即刻、1d、2d、3d行超声造影检查。记录腹腔积液量。于术前、术后1d、2d、3d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后3d取材行胰腺组织病理学检查。(5)15只比格犬全麻后开腹统一制作Ⅲ级胰腺损伤模型，超声造影引导下胰周留置引流管。随机分为模型组、GMTI组、GM组，每组5只。GMTI组于超声引导下经导管注射药物至胰腺（4.63ml/10kg），GM组静脉滴注GM（4.625ml/10kg），模型组经导管注射等量0.9％生理盐水。分别于术后即刻、1d、2d、3d、7d行超声造影检查。记录腹腔积液量及引流量。于术前、术后1d、2d、3d、7d测定血清AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α、血WBC及尿TAP。术后7d取材行胰腺组织病理学检查。
　　结果: (1)泊洛沙姆P-407单独对胰蛋白酶活性无影响;与泊洛沙姆P-407相比，10mg/ml和20mg/mlGM及GMTI可完全抑制胰蚤白酶活性（P＜0.01）。(2)与对照组相比，PT组血清AMS、CRP、TAP水平显著增高(P＜0.01);与PT组相比，GM组AMS、CRP、TAP水平显著下降(P＜0.01)，10mg/ml和20mg/ml组GMTI可显著抑制AMS、CRP、TAP的表达(P＜0.01);4组GMTI均完全抑制了TAP的表达(P＜0.01)。PT组病理改变较GM组与GMTI组明显，出现胰腺水肿，部分腺泡及胰岛结构破坏，核深染，伴有炎细胞浸润及少量出血。(3)与对照组相比，PT组AMS、LPS、CRP、IL-6、TNF-α水平均明显升高(P＜0.01);与PT组相比， GMTI组各指标均明显降低(P＜0.01);与GMTI组相比，造模后1h PT组各指标明显升高(P＜0.01)，GMTI组略下降(P＜0.01)，造模后6h与24h，PT组AMS活性明显升高(P＜0.01)，GMTI治疗组各指标明显降低(P＜0.01)。GMTI组较PT组腹水量明显减少（P＜0.01）。PT组镜下见大范围的腺泡结构破坏，间质脂肪组织坏死，炎细胞浸润及出血，GMTI组腺泡结构破坏程度明显减轻。(4)超声造影清晰显示创伤灶及活动性出血，创伤灶为双期无增强或低增强。腹腔积液量1d较多，3d下降，腹水AMS、LIP升高。造模后1d至3d，前述各指标均较术前升高，3d开始下降(P＜0.01，P＜0.05)。镜下见部分胰腺细胞肿胀变性，核深染，伴灶性出血、坏死灶及炎细胞浸润。(5)超声造影示GMTI组创伤灶未见进一步扩大，PT组可见活动性出血及脓肿形成。腹腔积液量随时间延长减少。GMTI组腹水AMS、LPS较GM组减低（P＜0.01）。两治疗组血清AMS、LPS、CRP及尿TAP较PT组减低（P＜0.01，P＜0.05）。GM与GMTI组间无显著差异。镜下三组均出现腺体细胞坏死及纤维化，以GMTI组略轻。
　　结论: GMTI体外可抑制胰蛋白酶活性且有效浓度与GM相当;GMTI体内对Ⅱ级和Ⅲ级大鼠胰腺损伤模型及比格犬Ⅲ级胰腺损伤模型均具有明显保护作用，与阳性药物GM相当;超声造影引导下置管并局部注射GMTI治疗胰腺损伤可行，GMTI有效抑制胰酶活性，减轻了胰腺组织的炎症反应及病理改变。

目录

声明

缩略词表(Abbreviation)

摘要

前言

第一部分 胰酶抑制剂温敏凝胶治疗胰腺损伤的体外和体内初步研究

引言

第一节 胰酶抑制剂温敏凝胶抑制胰蛋白酶活性的体外实验

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

附图

第二节 胰酶抑制剂温敏凝胶治疗大鼠Ⅱ级胰腺损伤的实验研究

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

附图

第三节 胰酶抑制剂温敏凝胶治疗大鼠Ⅲ级胰腺损伤的实验研究

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

附图

第二部分 超声造影引导胰酶抑制剂温敏凝胶治疗犬胰腺损伤的研究

引言

第一节 比格犬胰腺损伤模型的建立及评价

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

附图

第二节 超声造影引导胰酶抑制剂温敏凝胶治疗犬胰腺损伤的实验研究

一、实验材料

二、实验方法

三、结果

四、讨论

附图

全文小结

参考文献

综述 AP动物模型制作方法的研究新进展

发表论文情况

参与的研究

获专利情况

致谢